粘多糖贮积症Ⅱ型患者艾杜糖-2-硫酸酯酶基因常见突变的检测

• 作者: 傅俊江 刘上峰 卢光琇 李麓芸 钟昌高
• 来源期刊: 中华医学遗传学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 粘多糖贮积症Ⅱ型 聚合酶链反应-单链构象多态性 突变检测
• 年，卷（期）: 2002,（3）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 243-245
• 页数: 3页
• 分类号: R394
• 字数: 1985字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1003-9406.2002.03.016

摘要

目的探讨并建立粘多糖贮积症Ⅱ型(mucopolysaccharidosisⅡ,MPSⅡ)患者艾杜糖-2-硫酸酯酶(iduronate-2-sulphatase, IDS)基因常见突变的检测方法.方法应用聚合酶链反应-单链构象多态性(polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism,PCR-SSCP)对IDS基因突变热点外显子3、8和9进行点突变检测;应用DNA测序对PCR-SSCP检出的突变进行序列分析;应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)对DNA测序的结果进行检测. 结果经PCR-SSCP发现该患者的IDS基因外显子9有明显异常泳动的条带;DNA测序发现患儿的外显子9发生点突变(C1672T),从而导致患者艾杜糖-2-硫酸酯酶蛋白发生氨基酸替换(R468W);PCR-RFLP电泳检测结果显示粘多糖贮积症Ⅱ型患者仅出现554 bp 1条带,而患儿父母出现257 bp和297 bp 2条带,进一步验证了序列分析的结果. 结论 PCR-SSCP分析、DNA序列分析和PCR-RFLP分析是诊断MPSⅡ的有效方法,三者联合使用可以相互验证、互为补充,提高基因诊断的准确率和成功率.