血小板第四因子在原核中的高效表达、分离纯化及活性测定

• 作者: 刁世勇 刘拥军 卢士红 蔡英林 韩忠朝 顾洁
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: PF4 基因表达 分离纯化 大肠杆菌 红白血病细胞系
• 年，卷（期）: 2002,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 7-9
• 页数: 3页
• 分类号: Q786
• 字数: 2532字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2002.06.005

摘要

目的:构建重组表达质粒pET-32c/PF4,并在原核中进行表达,以探讨其对白血病细胞系(HEL)细胞增殖的作用.方法:通过PCR方法从含有PF4基因的PQE-60/PF4质粒中扩增PF4,用NcoⅠ/Hind Ⅲ双酶切,克隆到原核表达质粒pET-32C中,使之在BL21表达,Ni-Chelating Sepharose 亲和柱纯化,用细胞集落形成方法研究重组PF4对HEL的抑制作用.结果:菌株筛选后在大肠杆菌中获得可溶性高效表达,重组PF4占菌体总蛋白的22%.肠激酶酶切除去N-端融合部分,获得了高纯度的重组人血小板第四因子(rh-PF4),纯度为95%以上.活性实验发现重组PF4可抑制HEL细胞集落的形成,抑制率为47%.结论:原核表达质粒pET-32C可高效可溶性表达PF4,重组PF4对HEL细胞的增殖有抑制作用.