胎儿间充质干细胞cDNA扣除文库的构建

• 作者: 曹华 李廷玉 李梁 杨莉 王冬梅 白慈贤 裴雪涛
• 来源期刊: 中国实验血液学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 间充质干细胞 抑制扣除杂交 cDNA扣除文库
• 年，卷（期）: 2002,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 89-92
• 页数: 4页
• 分类号: R318.5
• 字数: 2913字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-2137.2002.02.001

摘要

为了获得胎儿和成人间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)的差异表达基因,尤其是在胎儿MSC中特异表达的基因,应用抑制扣除杂交技术构建了胎儿和成人MSC cDNA扣除文库.首先,分别从胎儿和成人MSC中提取总RNA,按照SMART PCR方法依次合成单链和双链cDNA,经RsaI酶切后,胎儿MSC cDNA分别与两种不同的接头连接,再与成人MSC cDNA经过两次扣除杂交及两轮抑制性PCR扩增后,将产物与T载体连接构建成cDNA扣除文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增.结果:文库扩增后共获得890个克隆,对所获得的克隆进行PCR扩增鉴定,获得768个阳性克隆,阳性率为86.3%.插入片段大小分布在0.2-1kb,平均为400-600bp.结论:抑制扣除杂交技术是一种简便、有效的筛选差异表达基因的方法.胎儿MSC cDNA扣除文库的构建为进一步筛选、克隆胎儿MSC中特异性表达的功能相关基因奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李廷玉	重庆医科大学附属儿童医院营养研究室	129	797	17.0	22.0
2	裴雪涛	北京输血研究所干细胞研究室	4	6	2.0	2.0
3	王冬梅	北京输血研究所干细胞研究室	2	6	2.0	2.0
4	杨莉	北京输血研究所干细胞研究室	1	3	1.0	1.0
5	李梁	北京输血研究所干细胞研究室	1	3	1.0	1.0
6	白慈贤	北京输血研究所干细胞研究室	1	3	1.0	1.0
7	曹华	北京输血研究所干细胞研究室	1	3	1.0	1.0