中国红豆杉紫杉烯合酶cDNA的分离、表达和鉴定

• 作者: CHENG Ke-di LI Nong OUTANG Tao SHI Qing WANG Wei ZHU Ping 朱平 李秾 欧阳涛 王伟 石青 程克棣
• 来源期刊: 植物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 中国红豆杉 紫杉醇生物合成 紫杉烯合酶
• 年，卷（期）: 2002,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 181-187
• 页数: 7页
• 分类号: Q943.2
• 字数: 2069字
• 语种: 英文
• DOI: 10.3321/j.issn:1672-9072.2002.02.011

摘要

紫杉烯合酶是一种二萜环化酶,催化牛儿基牛儿基焦磷酸形成紫杉醇生物合成过程中的中间体紫杉烯.利用PCR扩增同源探针筛选cDNA文库,克隆了一个编码中国红豆杉(Taxus chinensis (Pilg.) Rehd.)紫杉烯合酶3′端的2 151 bp的cDNA片段,也通过PCR扩增得到了该基因5′端的611 bp的cDNA片段,将这两个cDNA片段拼接在一起,得到长2 712 bp的cDNA片段,具有一个2 586个碱基的开放阅读框架(ORF),编码包括质体转移肽在内的共862个氨基酸残基;该酶与太平洋红豆杉紫杉烯合酶有97%的同源性(identity),与其他植物萜类环化酶也有较高的同源性.利用融合表达载体pET-32a在大肠杆菌BL21trxB中表达,所表达的融合蛋白以包含体形式存在.包含体经过变性、复性和再折叠,利用His残基亲和凝胶柱层析得到融合的紫杉烯合酶.用毛细管气相色谱-质谱联用对酶促反应产物进行分析,结果表明,融合的紫杉烯合酶能催化产生4(5),11(12)-紫杉烯.