应用抑制性消减杂交方法构建斑秃毛乳头差异表达基因文库

• 作者: 向明明 宋志强 杨卫兵 杨希川 程波 郝飞
• 来源期刊: 中华医学美学美容杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 斑秃 基因 杂交
• 年，卷（期）: 2002,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 196-200
• 页数: 5页
• 分类号: R75
• 字数: 3788字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1671-0290.2002.04.009

摘要

目的构建斑秃区与正常毛囊毛乳头细胞(DPC)差异表达的cDNA正向和反向消减杂交文库,为从中克隆鉴定出斑秃特异性表达和生长期DPC特异性表达的基因奠定基础.方法应用抑制性消减杂交技术,分别从斑秃区DPC及正常头皮DPC提取总mRNA;依次合成单链及双链cDNA,分别与2种不同的接头连接,再进行正向和反向的2次消减杂交及2次抑制性PCR;将产物与T/A载体连接构建cDNA消减文库.结果构建成功具有高消减效率的斑秃区及正常头皮DPC cDNA消减文库,文库扩增后得到120个阳性克隆,其中90个克隆含有100～500 bp插入片段.结论应用抑制性消减杂交技术所构建的斑秃区及正常头皮DPC cDNA消减文库,为进一步批量筛选、克隆斑秃区及正常头皮DPC特异性表达的基因奠定了基础.