双单抗夹心ELISA方法检测血浆及组织中金葡菌肠毒素B

• 作者: 于燕 姚咏明 施志国 李红云 盛志勇 董宁 陆连荣
• 来源期刊: 感染、炎症、修复
• 年，卷（期）: 2002,（3）
• 所属期刊栏目: 论著摘要
• 页码范围: 166
• 页数: 1页
• 字数: 273字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-8521.2002.03.024

摘要

目的:细菌学研究表明,可溶性外毒素的产生是革兰阳性菌(G+菌)感染的重要标志之一,在G+菌感染性疾病的发生、发展中具有重要意义.其中金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)肠毒素和中毒性休克毒素-1(TSST-1)因其"超抗原"特性,以及它们在脓毒症和中毒性休克综合征中的特殊意义而倍受关注.本文建立了一种敏感、快速的酶免疫测定方法,用于定量检测动物体液及组织中金葡菌肠毒素B(SEB).方法:采用生物素-链亲素系统放大的双抗体夹心酶联免疫吸附方法,以SEB单抗1D2为包被抗体、生物素标记的另一种SEB单抗2D1为标记抗体进行测定.结果:在0.039～10.000μg/L浓度范围内将SEB标准品进行倍比稀释,平行测定4次.当SEB标准品浓度为0.039μg/L时,测得的平均A值仍明显高于阴性对照(分别为0.193和0.108).若以样品A值/阴性对照A值大于2(P/N＞2)作为阳性判断标准,则最低检出限为0.078μg/L(A=0.220).在0.078～10.000μg/L的浓度范围内,SEB标准品浓度与吸光度值线性关系良好,相关系数为r=0.9906,平均变异系数为5.32%.为了考察方法的精确度,在标准曲线适用的范围内选择3个SEB浓度(10.000μg/L、5.000μg/L和2.500μg/L),每个浓度重复测定4次,变异系数分别为6.82%、5.25%、和3.90%,平均变异系数为5.32%.回收实验显示,正常大鼠、家兔和人血浆中的平均回收率分别为96.43%、97.34%和19.99%,正常人尿液中平均回收率为91.53%.上述结果表明该方法准确性较高,可用于定性及定量检测动物血浆及人尿液中的SEB.结论:本法灵敏度高、准确性好、稳定性强,而且简便、快速,适用于动物血浆及组织中微量SEB的定量测定,并有一定的临床应用前景.