睾酮假单胞菌3α-羟类固醇脱氢酶基因的质粒载体构建及表达

• 作者: 刘英民 夏铁安 张国华 徐国宾
• 来源期刊: 生物化学与生物物理进展
• 学科: 医学
• 关键词: 睾酮假单胞菌 3α-羟类固醇脱氢酶 重组质粒 基因表达 胆汁酸
• 年，卷（期）: 2002,（6）
• 所属期刊栏目: 医学生化
• 页码范围: 966-969
• 页数: 4页
• 分类号: R446.1
• 字数: 2417字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3282.2002.06.029

摘要

从土壤中分离睾酮假单胞菌,提取其基因组DNA,PCR扩增3a-羟类固醇脱氢酶(3α-hsd)基因,将扩增产物用Nde Ⅰ/BamHⅠ消化,切下目的基因片段克隆到质粒pET-15b中构建重组pET-15b.将重组pET-15b转化入E.coli DH5a中,经酶谱分析和测序,鉴定出正确的重组质粒pET-15b.将重组pET-15b转化入宿主菌E.coli BL21(DE3)pLysS中,用硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达.提取细菌总蛋白质进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析并测定酶活性.粗提物中酶活性高达2.45×105 U/L.利用重组蛋白中的6个组氨酸(His)组成的"标签"进行亲和层析,经一步金属螯合亲和层析纯化后,重组蛋白在SDS-PAGE上呈现出均一的单一条带,回收率达68%.活性和纯度均较高的目的蛋白3α-HSD的获得,为血清总胆汁酸酶循环法测定奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐国宾	北京大学第一医院检验科	130	2817	24.0	49.0
2	夏铁安	北京大学第一医院检验科	50	1046	17.0	31.0
3	张国华	北京大学第一医院检验科	9	156	7.0	9.0
4	刘英民		1	10	1.0	1.0