犬2型腺病毒E3区的克隆及其缺失改造

• 作者: 何洪彬 余春 夏咸柱 张守峰 扈荣良 王雷 范泉水 邱薇 高玉伟
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 犬2型腺病毒 E3区 克隆 缺失
• 年，卷（期）: 2002,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 6-8
• 页数: 3页
• 分类号: Q782
• 字数: 1443字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2002.05.005

摘要

为构建可用于插入外源基因的犬2型腺病毒(CAV-2)E3区表达载体,用Kpn I对CAV-2 DNA进行酶切,回收含E3区的Kpn I B片段并将其克隆到质粒pBluescript II KS(+)中,获得了正向和反向插入的重组质粒,并对E3区进行了序列测定.根据E3区两末端的序列合成了两对突变引物,每对引物分别在E3区的24986bp及26360bp处各引入一个BglⅡ酶切位点.以E3区正向插入的重组质粒pBE3-2为模板,分别用两对突变引物经PCR法连续进行两次点突变,通过Bgl II酶切,最终筛选到在E3区的首尾两端各引入一个Bgl II酶切位点的突变重组质粒pBEM.利用Bgl II酶切将E3区切除约1.4kb的片段,然后在缺失部位插入了人工接头,接头设计了5个单一酶切位点,得到的pBE3L质粒可用于外源基因的插入.