一种改进的大引物PCR定点诱变方法

• 作者: 刘忠英 徐湘民 莫秋华 钟雄霖
• 来源期刊: 中华医学遗传学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 大引物 聚合酶链反应 定点诱变 β珠蛋白基因
• 年，卷（期）: 2002,（1）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 68-71
• 页数: 4页
• 分类号: R394
• 字数: 2937字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1003-9406.2002.01.019

摘要

目的建立一种改进的、简便易行的大引物PCR定点诱变技术.方法在两轮PCR中设计了两种不同的质粒DNA模板,两者分别缺少正向或反向外侧引物可结合的互补序列;当两种模板和两条外侧引物同时存在于一个反应管时,可以完全避免对野生型目的基因全长的扩增.第1轮PCR由正向外侧引物和突变引物合成大引物,这一产物无需凝胶纯化而直接用于第2轮PCR.第2轮PCR的第1阶段由大引物延伸合成全长突变终产物,两条外侧引物则在第2阶段指数扩增,所有终产物均含所需致突变位点.结果用此方法对中国人β地中海贫血15种稀少突变类型进行定点诱变,并将诱变得到的全长人β珠蛋白基因克隆到pGEM○ R-T载体后全长测序,所有克隆均鉴定为所需突变型.结论这种改进的大引物PCR定点诱变技术省时、省工,诱变的成功率可00%,适于实验室常规应用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐湘民	第一军医大学细胞生物学与医学遗传学教研室	15	218	9.0	14.0
2	刘忠英	第一军医大学细胞生物学与医学遗传学教研室	5	113	4.0	5.0
3	莫秋华	第一军医大学细胞生物学与医学遗传学教研室	5	94	5.0	5.0
4	钟雄霖	第一军医大学细胞生物学与医学遗传学教研室	1	22	1.0	1.0