乙肝病毒核心启动子部分缺失对其活性及X蛋白转式激活作用的影响

• 作者: 侯金林 彭劼 郭亚兵 陈金军 骆抗先
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 乙型肝炎病毒 核心启动子 缺失变异 表达载体 转染
• 年，卷（期）: 2002,（3）
• 所属期刊栏目: 病毒学
• 页码范围: 266-268
• 页数: 3页
• 分类号: R37
• 字数: 2994字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2002.03.012

摘要

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)20/21bp缺失(nt1 748/1 747～nt 1 767)的核心启动子(CP)的活性及CP部分缺失对X蛋白转式激活作用的影响. 方法将HBV CP nt 1 601～1 860区段克隆到氯霉素乙酰转移酶(CAT)报告基因表达载体(pCAT3-Basic)上,构建重组pCAT3质粒(20d-pCAT3、21d-pCAT3、wt-pCAT3)转染HepG2细胞以检测CP活性.将wt-pCAT3与野毒株型或CP 20/21bp部分缺失的含1.2拷贝HBV全基因重组质粒(P3.8Ⅰ、20d-P3.8Ⅰ、21d-P3.8Ⅰ)共转染HepG2细胞以检测X蛋白的转式激活作用.ELISA方法检测CAT表达量. 结果 PCR扩增和双酶切初步筛选的克隆株,经测序最终鉴定重组质粒克隆成功.重组pCAT3质粒转染HepG2细胞表明,CP缺失的重组表达载体(20d-pCAT3、21d-pCAT3)较野毒株型CP的重组表达载体(wt-pCAT3)产生的CAT量明显下降,均仅为后者的14.2%;共转染试验表明,wt-pCAT3 可被P3.8Ⅰ产生的完整X蛋白转式激活,而分别不能或仅能较弱地被共转染的20d-P3.8Ⅰ、21d-P3.8Ⅰ产生的截短的X蛋白所改变. 结论 HBV 20/21bp缺失的CP活性较野毒株型CP活性显著下降;CP20/21bp缺失株的X蛋白难以发挥转式激活作用.