摘要:
[目的] 本研究试图在细胞和分子水平上探讨爱普列特对正常SD大鼠的生殖毒性,为指导临床用药提供理论基础.[方法] 以颈椎脱臼法处死大鼠,取精子置入预温37℃的M199培养液,调整精子浓度为(6.0±2.0)×105精子/ml.应用0.60、6和60 μmol/L的爱普列特处理精子,在给药1和2 h后用精子质量检测系统(CASA)分析精子运动能力.另在无菌条件下,取大鼠输精管,剪碎,以0.25%的胰蛋白酶溶液消化,待细胞分散后,经100 g离心5 min,用14-g金属网滤取单个分散的输精管细胞,将其置于37℃、5%CO2、95%空气和适宜湿度的二氧化碳培养箱培养.而后加入0.1,0.3或1 μmol/L的爱普列特处理一定时间,运用HE染色、流式细胞计数和PCR,研究爱普列特对SD大鼠精子及体外原代培养的输精管细胞的生殖毒性作用.[结果] 计算机辅助分析系统分析结果表明:大鼠精子给予0.6、6或60 μmol/L爱普列特处理2 h后,精子曲线运动速率(VCL)、精子直线运动速率(VSL)及精子活率(MOT)均较对照组下降,但无显著性差异.对照组、0.1、0.3和1.0 μmol/L爱普列特作用于输精管上皮细胞的凋亡率分别为5.2%、5.5%、47.67%和62.21%.HE染色显示,爱普列特0.3和1 μmol/L处理后细胞染色质向膜周边凝聚,核深染、固缩,呈明显的细胞凋亡现象.PCR结果显示:对照组与经爱普列特处理后的SD大鼠输精管细胞内均有bc1-2表达,DNA测序结果提示:给予爱普列特后,SD大鼠输精管细胞内bc1-2探针序列与溶剂对照组相比无明显变化.[结论] 在临床剂量范围内,爱普列特对SD大鼠精子活性无明显影响,与溶剂对照组相比,0.1 μmol/L爱普列特对正常SD大鼠输精管无明显不良作用;0.3和1 μmol/L可明显诱导正常SD大鼠输精管细胞发生凋亡,爱普列特对SD大鼠输精管细胞内bc1-2基因序列无影响.