半巢式聚合酶链反应-微孔板杂交法检测沙眼衣原体

• 作者: 凌文利 张益康 李欣欢 陈荣安
• 来源期刊: 南华大学学报(医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 沙眼衣原体 聚合酶链反应 杂交法 限制性内切酶
• 年，卷（期）: 2002,（2）
• 所属期刊栏目: 临床论著
• 页码范围: 147-149
• 页数: 3页
• 分类号: R374.1
• 字数: 2020字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1116.2002.02.017

摘要

目的应用半巢式聚合酶链反应-微孔板杂交法(半巢式PCR-MPH)检测泌尿生殖道沙眼衣原体(Ct). 方法分别用质粒和主要外膜蛋白基因引物进行扩增.将下游引物用生物素标记,经半巢式PCR扩增Ct主要外膜蛋白基因后,扩增产物被包被有链霉亲和素的微孔板捕获,经碱变性后与标有荧光素的特异性探针进行杂交.然后通过辣根酶标记的抗荧光素抗体与杂交分子反应,经过酶底物显色,通过测定吸光度来判断结果. 结果主要外膜蛋白基因引物半巢式PCR较质粒引物PCR更敏感,比半巢式PCR产物酶切后电泳法高10倍 ,半巢式PCR-MPH法特异性强.该法重复法好,批内CV值<10%,批间CV值<15%;该法在包被浓度为4 mg/L、产物1∶20稀释、与微孔板结合20 min后加入10 pmol/mL探针杂交30 mi n, 用1∶3 000稀释的酶显色条件下有最佳结果. 结论该法操作简便、敏感性和特异性均高 ,无放射性和EB染料污染,适于临床样本的常规检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈荣安		8	61	4.0	7.0
2	张益康		7	61	4.0	7.0
3	李欣欢		3	29	2.0	3.0
4	凌文利		1	1	1.0	1.0