VEGF逆转录病毒载体构建及在小鼠骨髓细胞中的表达

• 作者: 余希杰 党耕町 蔡善保 马大龙 马庆军
• 来源期刊: 中华医学杂志(英文版)
• 学科: 医学
• 关键词: 内皮细胞生长因子 逆转录病毒 基因治疗 骨髓基质细胞
• 年，卷（期）: 2002,（6）
• 页码范围: 914-918
• 页数: 5页
• 分类号: R68
• 语种: 英文
• DOI: 10.3760/j.issn:0366-6999.2002.06.025

摘要

目的构建人VEGF121逆转录病毒表达载体,探讨应用血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因治疗骨科缺血性疾患的可行性.方法采用分子克隆技术从pCDⅠ/VEGF121质粒获得hVEGF121cDNA, 并克隆到pLXSN逆转录病毒质粒.经酶切及测序鉴定正确后,包装成为pLXSN/VEGF121重组逆转录病毒, 并进行滴度测定.培养小鼠骨髓基质细胞,用重组病毒感染小鼠骨髓基质细胞.经筛选后,用PCR及RT-PCR方法测hVEGF121cDNA在基质细胞中的整合及转录;用免疫印迹及免疫组化检测VEGF121蛋白的表达;用MTT检测转基因细胞培养上清中VEGF的促人内皮细胞增殖活性.结果经酶切鉴定及基因测序证实重组逆转录病毒质粒正确,包装的病毒滴度为6×105.PCR证实基因组DNA有hVEGF121cDNA的整合;RT-PCR证实有hVEGF121mRNA的转录;Western blot及免疫组化检测有VEGF121蛋白的表达;MTT试验显示转基因细胞培养上清中VEGF121能促进人内皮细胞增殖.结论我们成功地构建了pLXSN/VEGF121重组逆转录病毒载体,该载体不仅能够有效地表达VEGF121蛋白,且表达的蛋白具有促进人内皮细胞增殖的生物学活性,这些均为进一步应用该载体研究VEGF基因治疗骨科缺血性疾患打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	党耕町	北京大学第三医院骨科	187	3697	31.0	51.0
2	马大龙	北京大学人类疾病基因中心	71	944	16.0	28.0
3	马庆军	北京大学第三医院骨科	75	1088	15.0	29.0
4	蔡善保	北京大学第三医院骨科	4	44	2.0	4.0
5	余希杰	北京大学第三医院骨科	3	42	2.0	3.0