酵母系统表达的重组人亲肝素性促轴突生长因子及其促轴突生长作用

• 作者: 刘银坤 吴欣 宋后燕 官孝群 王毅超 陈中伟 陈峥嵘
• 来源期刊: 中华医学杂志(英文版)
• 学科: 医学
• 关键词: 基因表达 重组蛋白质 毕赤酵母 培养肿瘤细胞
• 年，卷（期）: 2002,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1352-1357
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 语种: 英文
• DOI: 10.3760/j.issn:0366-6999.2002.09.017

摘要

目的亲肝素性促轴突生长因子(heparin-binding neurite-promoting actor, HBNF)最早在脑组织中发现,能促进体外培养的神经细胞的轴突生长.本研究利用酵母系统表达人亲肝素性促轴突生长因子,并观察其对体外培养细胞的促轴突生长作用.方法从18周流产的人胎脑组织提取总RNA,利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)获得人亲肝素性促轴突生长因子(HBNF)的编码基因,扩增后与穿梭表达载体pPIC9K重组,鉴定筛选得到含HBNF cDNA基因的阳性克隆.用此重组表达载体通过电穿孔法转化酵母菌株GS115,在不含组氨酸的MD平板上筛选His+表型,利用G418抗性筛选多拷贝酵母菌重组子,PCR鉴定含有HBNF cDNA基因与酵母染色体基因组整合的菌株.阳性克隆经甲醇诱导后获得重组人亲肝素性促轴突生长因子(hrHBNF)在培养液中的分泌表达.将层析纯化的表达产物加入体外培养的大鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞观察其促轴突生长作用.结果对重组表达载体的序列分析表明目的基因序列与基因库资料完全一致,目的基因在该载体中位于α因子分泌信号序列的下游,与α因子开放阅读框相连.SDS-PAGE蛋白电泳证实诱导表达的产物分子量约为18 kDa,与文献报道一致.该蛋白产物对于培养的大鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞具有促轴突生长作用.结论通过酵母菌可以稳定地表达人重组亲肝素性促轴突生长因子,而且表达产物hrHBNF具有促进神经轴突生长的生物学活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈峥嵘	复旦大学医学院附属中山医院骨科	77	508	11.0	16.0
2	陈中伟	复旦大学医学院附属中山医院骨科	44	480	12.0	20.0
3	刘银坤	复旦大学医学院附属中山医院肝研所	121	643	13.0	18.0
4	宋后燕	复旦大学医学院分子遗传研究室	94	467	12.0	17.0
5	官孝群	复旦大学医学院分子遗传研究室	10	97	5.0	9.0
6	王毅超	复旦大学医学院附属中山医院骨科	7	21	2.0	4.0
7	吴欣	复旦大学医学院附属中山医院肝研所	8	20	3.0	4.0