红曲霉DNA提取及其RAPD-PCR反应体系的建立

• 作者: 李思光 汤祖辉 袁勇芳 许杨
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 红曲霉 RAPD-PCR DNA提取 氯化苄
• 年，卷（期）: 2002,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2-4
• 页数: 3页
• 分类号: Q812|Q933
• 字数: 3091字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2002.01.002

摘要

采用改进的氯化苄法对红曲霉DNA进行提取纯化,探讨了提取液中EDTA的浓度以及其他因素对提取结果的影响.同时,以该法提取的DNA为模板,采用正交实验优化RAPD分析最佳反应条件.结果表明,当提取液中EDTA浓度为125mmol/l时,所得的红曲霉DNA的质量和数量均较理想,每克红曲霉菌丝体(湿重)能提取到50μg的DNA,分子量约为25kb,以此DNA为模板进行PCR扩增,其最佳反应体系为:Mg2+2.0mmol/l,dNTPs 0.15mmol/l,Taq 0.05U/μl,模板DNA 1.2ng/μl,随机引物 0.36μmol/l,Tris-HCl 10mmol/l pH9.0,KCl 50mmol/l,Nonidet P40 0.1%.另外,通过对比RNA酶消化前后的模板扩增结果证明了本实验酶的消化的必要性,对比了不同预变性时间处理模板对RAPD-PCR扩增的影响,发现不经过预变性的模板扩增结果最理想.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李思光	南昌大学生命与食品工程学院	59	849	17.0	27.0
2	许杨		4	117	4.0	4.0
3	袁勇芳		2	97	2.0	2.0
4	汤祖辉		1	30	1.0	1.0