抗人大肠癌单链抗体基因的克隆与表达

• 作者: 宋今丹 方瑾
• 来源期刊: 癌症
• 学科: 医学
• 关键词: 单链抗体(scFv) 大肠肿瘤 基因表达
• 年，卷（期）: 2002,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 740-744
• 页数: 5页
• 分类号: R735.3
• 字数: 4766字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-467X.2002.07.008

摘要

背景与目的 : 单链抗体相对于完整抗体具有免疫源性低、对肿瘤组织穿透力强的特 点,日益成为肿瘤诊断和治疗的良好导向载体. 本研究的目的是将抗人大肠癌单克隆抗体 ND-1的重链可变区 VH和轻链可变区 VL基因借助一短肽序列 (Gly4Ser)3进行重组,构建单链抗 体基因 ND-1scFv, 并使其在大肠杆菌中表达. 方法 : 采用 RT-PCR技术从能够分泌 ND-1单抗 的鼠杂交瘤细胞中扩增 VH和 VL基因,通过重叠延伸拼接 PCR在 VH和 VL基因间引入连接短肽,体 外构建 ND-1scFv基因,经过常规转化和筛选,将其克隆至 PET-28a( + ) 表达载体,由 IPTG诱导在大肠杆菌 BL21中表达为 ND-1scFv与 His-Tag的融合蛋白. 表达产物用 Ni-NTA resin亲和层析方法纯化,并采用 ELISA方法检测其免疫活性. 结果 : 序列分析表明,ND-1scFv基因全长 732bp, VH354bp位于上游 ; VL 330bp位于下游. SDS-PAGE显示,重组蛋白 相对分子量 30kDa, 与预期结果一致. scFv表达产物以不溶性包涵体形式存在,经亲和层析纯 化后蛋白纯度达 94%. ELISA结果显示 scFv保留了与亲本抗体 ND-1相似的免疫活性,结论 : 成功地构建了抗人大肠癌单链抗体 ND-1scFv, 并在大肠杆菌中获得了较高水平的功能性表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋今丹	中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室	72	443	12.0	17.0
2	方瑾	中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室	20	101	7.0	9.0