重组逆转录病毒质粒pLNCX/iNOS的构建

• 作者: 朱梁军 潘英 陈宝安
• 来源期刊: 江苏医药
• 学科: 医学
• 关键词: 一氧化氮合酶 逆转录病毒 基因转染 聚合酶链式反应
• 年，卷（期）: 2002,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 26-28
• 页数: 3页
• 分类号: R37
• 字数: 2195字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-3685.2002.01.009

摘要

构建含一氧化氮合酶(iNOS)基因的重组逆转录病毒pLNCX/iNOS质粒.方法用PCR技术从pCMV/iNOS质粒中扩增出iNOS全长DNA,用限制性内切酶Hind Ⅲ和Cla Ⅰ对iNOSDNA和逆转录病毒质粒pLNCX分别进行双酶切.在T4连接酶的作用下,构建重组逆转录病毒质粒pLNCX/iNOS;用脂质体介导的方法把重组质粒DNA转染进入包装细胞PA317中,经过G418筛选出抗性克隆.通过NIH3T3细胞测定病毒液的病毒滴度.结果经过酶切分析证实PCR扩增的iNOSDNA基因序列与鼠源性iNOS基因序列完全一致.重组质粒经酶切分析与预期的结果一致.G418筛选出16个抗性克隆,能稳定合成并分泌重组逆转录病毒颗粒.NIH3T3细胞测定病毒滴度为2.1×104CFU/ml.结论逆转录病毒载体pLNCX可有效地介导iNOS的转染.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈宝安		235	1321	18.0	25.0
2	潘英		11	25	4.0	4.0
3	朱梁军		1	6	1.0	1.0