乙型肝炎病毒核心启动子区基因异质性及对其转录活性的影响

• 作者: 刘妍 成军 李克 牟劲松 皇甫竞坤 董菁 钟彦伟 韩萍
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝炎病毒,乙型 核心启动子 异质性 报告基因 转染
• 年，卷（期）: 2002,（2）
• 所属期刊栏目: 专题研究
• 页码范围: 128-130
• 页数: 3页
• 分类号: R512.6
• 字数: 3065字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2002.02.012

摘要

从慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染患者外周血中扩增核心启动子(CP)基因序列,克隆入pGEM-Teasy质粒,随机挑选克隆进行DNA测序以确定病毒的变异程度.结果提示,HBV长期携带者体内有准种共存,CP区内存在热点缺失突变及散在点突变.为了进一步探讨CP区基因异质性对其转录活性的影响,将野生株及不同缺失突变的CP基因片段克隆入pcDNA3.1(-)载体的EcoRI位点,筛选反向克隆,经KpnI和XhoI双酶切后克隆入氯霉素乙酰转移酶(CAT)报告基因表达载体pCAT3-basic上,构建重组报告质粒.以Lipofectamine PLUS转染试剂转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,用ELISA方法检测CAT表达量,反映了CAT基因上游启动子的转录活性.结果显示,成功构建了重组报告质粒,与野生株比较,HBV CP区准种群的存在不同程度地降低了CP基因的转录活性.