引起成人腹泻的新轮状病毒在原代人胚肾细胞上的培养和传代

• 作者: 宋俊其 崔晓英 杨凤蓉 杨红彦 毕烨 纪绍忠 陶小霞
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 腹泻 轮状病毒属
• 年，卷（期）: 2002,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 14-18
• 页数: 5页
• 分类号: R37
• 字数: 4688字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0376-2491.2002.01.005

摘要

目的探讨用细胞培养系统在体外培养新轮状病毒(RV).方法含新RV的病人粪便标本经高浓度胰蛋白酶(100 μg/ml)37℃作用1 h,接种于原代人胚肾(PHEK)细胞,37℃吸附1 h后,补加无血清含胰蛋白酶(100 μg/ml)的 DMEM,37℃转鼓培养3 d,收获细胞培养液,冻融1次,作为下一代培养的接种物,培养传代.用聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫荧光(IF)、电镜(EM)、免疫电镜(IEM)等方法对细胞培养液进行病毒核酸、抗原及形态检查.结果从10份粪便标本中培养分离到1株病毒,定名为J19.该病毒在PHEK细胞上稳定培养传代(28代),其病毒核酸(dsRNA)电泳图型与初始用于接种细胞的粪便标本中的dsRNA电泳图型完全一致,而与A、B、C组RV dsRNA电泳图型明显不同.J19株感染的细胞与病人恢复期血清呈IF阳性反应,与成人腹泻轮状病毒(ADRV)腹泻病人恢复期血清、兔抗A组RV和兔抗ADRV血清均为IF阴性;EM和IEM在该病毒的细胞培养液中观察到,在形态上与初始接种物中病毒一样的轮状病毒颗粒,而且可被新RV腹泻病人恢复期血清凝集.结论成功地从含新RV的成人腹泻粪便标本中分离培养出1株轮状病毒--J19,并能在细胞稳定传代.J19株不属于A、B、C组RV,而是一种新RV.关于新RV在细胞上培养传代,本文是第一次报告.