结核杆菌分泌蛋白Ag85A基因的克隆、表达及其诊断价值

• 作者: 何菊芳 吴雪琼 周文强 张俊仙 张妍 张涛 王安生 郑冬燕
• 来源期刊: 广东医学
• 学科: 医学
• 关键词: 抗原 Ag85A基因 血清学诊断 分支杆菌,结核
• 年，卷（期）: 2002,（12）
• 所属期刊栏目: 临床研究
• 页码范围: 1258-1259
• 页数: 2页
• 分类号: R52
• 字数: 2751字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-9448.2002.12.017

摘要

目的获得重组抗原85A(rAg85A),研究其免疫学特性,评价其在结核病血清学诊断中的价值.方法应用基因工程技术克隆、表达、纯化Ag85A蛋白,通过Westem印迹分析其抗原性.分别以结核分支杆菌纯蛋白衍生物(PPD)或纯化的rAg85A蛋白为抗原,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)及结核病一步法检测血清中抗结核抗体.结果重组质粒pET30a-Ag85A测序表明与报道的序列相同.它在大肠杆菌BL21(DE3)细胞内以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的2%左右,Western印迹分析它与抗结核分支杆菌多克隆抗体具有良好的免疫反应性.纯化的rAg85A样品纯度约85%左右,每100ml培养菌可获得2 mg左右的重组蛋白.以33例正常人血清的OD值+2 s为正常界限值,一步法的特异性和敏感性分别为87.9%和65.6%;PPD分别为93.9%和62.5%;rAg85A分别为93.9%和15.6%.结论pET30a-Ag85A大肠杆菌工程菌能以包涵体形式表达rAg85A蛋白,该蛋白具有较高的抗原特异性,但检测抗结核抗体的灵敏度低.