携带人内皮一氧化氮合酶基因的AAV重组表达载体的构建

• 作者: 卢大儒 姚纪花 缪朝玉 苏定冯 薛京伦 贺晨霞 陈浩明
• 来源期刊: 中国药理学报（英文版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 一氧化氮 一氧化氮合酶 质粒 基因治疗 腺相关病毒
• 年，卷（期）: 2003,（7）
• 所属期刊栏目: 研究原著
• 页码范围: 637-640
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 语种: 英文

摘要

目的:构建一个新型的携带有人内皮一氧化氮合酶(eNOS) cDNA的质粒载体并研究其体外表达，以用于基因治疗.方 法:eNOS cDNA插入到腺相关病毒质粒pSNAV-1的EcoR Ⅰ位 点.该质粒的启动子为CMV启动子，并携带有腺相关病毒的 末端重复序列.构建好的质粒转染到两种哺乳动物细胞BHK 和C2C12细胞中，通过PCR和RT-PCR分别检测eNOS cDNA和 mRNA.结果:限制性内切酶分析证明，eNOS cDNA以正确 的方向插入到pSNAV-1质粒中.PCR检测表明pSNAV-eNOS被 转入BHK和C2C12细胞中.RT-PCR检测表明转染有pSNAV- eNOS的细胞可表达eNOS mRNA.结论:成功构建的pSNAV eNOS可在体外培养的哺乳动物细胞中表达人eNOS mRNA.