猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-1a株基因组全长cDNA克隆的构建

• 作者: 仇华吉 刘光清 周艳君 童光志 薛强
• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 基因组全长cDNA克隆 感染性分子克隆
• 年，卷（期）: 2003,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 401-407
• 页数: 7页
• 分类号: S852.65|Q784
• 字数: 5035字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0589.2003.06.001

摘要

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)嗜好在PAM和其他单核细胞上生长,如果把PRRSV作为一种病毒活载体,它就可以携带外源抗原高效进入猪体的免疫系统,更好地刺激机体产生免疫应答.本实验根据PRRSV基因组和克隆载体的限制性内切酶酶切位点,将PRRSV基因组设计为8段进行了反转录和扩增(RT-PCR),将得到的片段克隆到质粒pBluescript II SK(-)或pMD 18 T_vetcor中.在扩增5'端时,运用5'RACE获得了基因组5’最末端序列，在亚克隆入pOK12前在5’端上游引入了T7启动子序列 。选取一个克隆在3’端紧挨ORF7下游引入了PacⅠ位点，以期作为感染性分子克隆的分子标志。将扩增片段在pBuescript II SK(-)中进行了部分连接后，亚克隆于低拷贝质粒pOK12中，在pOK12中进行了长片段的连接，并获得了基因组全长cDNA克隆。进行全基因测序后，在3处发现有6个核苷酸的缺失，运用插入突变修补丢失的碱基，最终获得了含有PRRSV CH-la株基因组全长cDNA的重组质粒pOKCH-laF和含有分子标志PcaⅠ的基因组全长cDNA克隆pOKCH_laPacIF。在本试验中构建的基因组全长cDNA克隆为进一步获得具有感染性的PRRSV分子克隆并研究该病毒基因组结构和功能奠定了基础。 了基因组5'最末端序列,在亚克隆入pOK12前在5'端上游引入了T7启动子序列 .选取一个克隆在3'端紧挨ORF7下游引入了PacⅠ位点,以期作为感染性分子克隆的分子标志.将扩增片段在pBuescript II SK(-)中进行了部分连接后,亚克隆于低拷贝质粒pOK12中,在pOK12中进行了长片段的连接,并获得了基因组全长cDNA克隆.进行全基因测序后,在3处发现有6个核苷酸的缺失,运用插入突变修补丢失的碱基,最终获得了含有PRRSV CH_la株基因组全长cDNA的重组质粒pOKCH-laF和含有分子标志PcaⅠ的基因组全长cDNA克隆pOKCH-laPacIF.在本试验中构建的基因组全长cDNA克隆为进一步获得具有感染性的PRRSV分子克隆并研究该病毒基因组结构和功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	童光志		168	2158	24.0	40.0
10	刘光清		2	17	2.0	2.0
11	薛强		1	15	1.0	1.0
12	周艳君		2	28	2.0	2.0
13	仇华吉		5	143	4.0	5.0