乙型肝炎病毒表面抗原preS2+S基因在Pichia Pastoris酵母系统的分泌表达

• 作者: 付士红 夏国良 宋宏 张智清 徐丽宏 梁国栋 王大维 苏乃伦
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: 乙型肝炎病毒表面抗原preS2+S基因 adw2亚型 Pichia Pastoris酵母表达系统 分泌型表达
• 年，卷（期）: 2003,（3）
• 所属期刊栏目: 人与动物病毒
• 页码范围: 224-229
• 页数: 6页
• 分类号: R373.21|Q786
• 字数: 6011字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-8721.2003.03.007

摘要

拟获得adw2亚型乙型肝炎(乙肝)病毒表面抗原preS2+S基因在Pichia Pastoris酵母分泌型表达系统(pPIC9K)的高效表达.实验首先将adw2亚型乙肝病毒表面抗原preS2+S基因重组到分泌型酵母表达载体(pPIC9K)形成表达质粒,电转化酵母细胞KM71,G418筛选多拷贝整合克隆,经甲醇诱导表达并用SDS-PAGE电泳及酶免疫法检测表达产物.经100个克隆筛选获得了表达量较高的表达菌株WC4.该菌株甲醇诱导后细胞上清10倍浓缩SDS-PAGE电泳检测显示,细胞上清中有特异蛋白条带,且第6天表达量最高,表达产物单体分子量为31kD左右.用美国雅培公司AUZYME MONOCLONAL试剂盒估算表达量为2μg/100 OD600细胞.上述结果表明,乙肝病毒表面抗原preS2+S基因在本系统中获得了分泌表达.同时检测了酵母细胞裂解液中特异蛋白质的表达,结果发现,自甲醇诱导后第一天即可检测到表达产物,而且除了第6天细胞外表达量高于细胞内外,其余各天的表达水平均表现为细胞内高于细胞外.以上结果提示,利用分泌型酵母表达系统表达乙肝病毒表面抗原在技术上可行,但表达产量偏低,一些蛋白滞留在细胞内未能分泌到培养基中.