产生大环聚酮类天然产物放线菌的分子筛选研究

• 作者: 唐蜀昆 姜成林 张永光 徐丽华 徐平 李文均 贺秉坤 高惠英
• 来源期刊: 中国抗生素杂志
• 关键词: 聚酮合成酶 大环聚酮类化合物 聚合酶链反应 极端环境 分子筛选 放线菌
• 年，卷（期）: 2003,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 321-324，375
• 页数: 5页
• 分类号: Q93
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-8689.2003.06.001

摘要

目的建立一套简便、快速、高效的大环聚酮类化合物产生菌基因筛选体系,为聚酮类药物筛选搭建一个新的技术平台;认识PKS-Ⅰ基因在不同环境放线菌群中的分布规律,为新药筛选中微生物资源的定向分离提供依据.方法通过对大环聚酮类化合物生物合成途径所用的Ⅰ型聚酮合成酶氨基酸和核苷酸序列的同源性比较分析,设计了一对引物用于扩增KS/AT功能域约1.6kb目的基因片段,依据放线菌基因组中Ⅰ型PKS合成酶基因的存在与否标定可能的大环聚酮类天然产物产生菌.结果利用建立的大环聚酮类化合物产生菌基因筛选体系对98株嗜碱放线菌、99株链霉菌、46株嗜盐放线菌和757株稀有放线菌进行了筛选,研究表明嗜碱放线菌、链霉菌、嗜盐放线菌和稀有放线菌Ⅰ型聚酮合成酶基因的阳性率分别为26.5%、20.4%、15.2%和9.35%.结论利用组合放线菌基因组DNA快速提取技术和PKS-Ⅰ基因兼并引物PCR扩增技术建立了快速、简便、高效的大环聚酮类化合物产生菌基因筛选体系;并对不同环境条件的放线菌菌群的PKS-Ⅰ基因分布进行了研究,结果不仅表明了放线菌PKS Ⅰ聚酮合成酶分布的广泛性,而且表明极端环境放线菌,尤其是嗜碱放线菌是大环聚酮类化合物潜在的丰富资源,为新药筛选有效菌源的确定提供了可靠依据.