地中海拟无枝菌酸菌U32中生物素羧基载体蛋白结构基因的克隆、表达及转录

• 作者: 卢捷 姚玉峰 姜卫红 焦瑞身
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 地中海拟无枝菌酸菌 乙酰辅酶A羧化酶 生物素羧基载体蛋白 转录调节
• 年，卷（期）: 2003,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 56-64
• 页数: 9页
• 分类号: Q786
• 字数: 5050字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0001-6209.2003.01.009

摘要

乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl CoA Carboxylase EC 6.4.1.2, ACC)催化依赖于ATP的乙酰辅酶A羧化形成丙二酸单酰辅酶A,该反应是脂肪酸生物合成途径中的第一步,也是受到调控的关键一步.根据结核分枝杆菌(M. tuberculosis)和天蓝色链霉菌(S. coelicolor)中ACC-α亚基的氨基酸保守序列和地中海拟无枝菌酸菌U32对氨基酸密码子的使用偏好,设计简并引物以U32基因组DNA为模板扩增出一条约250bp的片段,并以此片段作探针成功地从U32基因组cosmid文库中克隆到相应的ACC-α亚基的编码基因accA.该基因对应的ORF长1797bp,编码一个598个氨基酸的蛋白,推算出的分子量是63,714Da;基因G+C mol%含量为70.1%,符合U32基因结构特征,距起始密码子GTG上游6个碱基处有链霉菌典型的RBS序列AGGAGG,并有生物素羧化酶特征的ATP结合区.利用pET28(b)系统构建表达载体,在E. coli BL21(DE3)中实现了accA的诱导表达,产物大部分以可溶形式存在,并通过Western Blot证明该蛋白上确有共价结合的生物素.Northern Blot分析了各种氮源对accA基因转录水平的不同影响.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卢捷		1	7	1.0	1.0
2	姚玉峰		1	7	1.0	1.0
3	姜卫红		1	7	1.0	1.0
4	焦瑞身		1	7	1.0	1.0