农杆菌介导加幼苗直接形成将Bt-cry1A(b)基因转入印度棉花

• 来源期刊: 棉花学报
• 学科: 农学
• 关键词: 棉花 根癌农杆菌 Bt-cry1A(b) 非基因依赖型转化 再生 卡那霉素 茎尖分生组织
• 年，卷（期）: 2003,（1）
• 所属期刊栏目: 研究与进展
• 页码范围: 51-58
• 页数: 8页
• 分类号: S432.621
• 语种: 中文

摘要

利用农杆菌介导法用Bt-cry1A(b)基因对印度栽培棉种进行非基因依赖型遗传转化和植株再生.将印度栽培棉品种Anjali(LRK-516)和LRA-5166与携带Bt-cry1A(b)+nptⅡ基因的根癌农杆菌LBA4404共培养,在含100tμg@ml-1卡那霉素的筛选培养基上获得了可能的转基因直接再生苗.细菌浓度、共培养时间、感染组织的阶段和大小、标记筛选浓度、培养基成分和激素等都影响转化效果和效率.对程序进行了优化.经PCR、Southern杂交、ELISA等方法分别检测,证实了Bt-cry基因的插入和表达.Southern分析表明转化植株存在3～5个基因拷贝,但CRY蛋白表达量非常低(为叶蛋白的0.003%～0.004%)且生化抗虫性很弱或基本不影响鳞翅目昆虫.尽管如此,该方案仍适用于其它CRY基因或重要经济型基因进行非基因依赖型遗传转化和再生,产生转基因棉花.