人双专一性磷酸酶活性位点Cys124附近精氨酸突变及功能

• 作者: 施蕴渝 曾王勇 汪迎华
• 来源期刊: 生物化学与生物物理学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 人痘苗病毒H1相关磷酸酶 精氨酸 定点突变 稳态动力学
• 年，卷（期）: 2003,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 149-153
• 页数: 5页
• 分类号: Q5
• 语种: 英文

摘要

为研究人双专一性磷酸酶活性位点Cys124附近3个带正电的精氨酸对酶催化功能的影响, 用QuikChange 定点突变方法获得6个突变体: R125L、R130L、R130K、R130L/S131A、R158K和R158L. 将含突变基因的重组质粒转化大肠杆菌菌株BL21(DE3), 经IPTG诱导表达获得的目的蛋白质均以可溶形式存在. 通过镍离子亲和层析纯化得到纯度大于90%的蛋白质. 对人痘苗病毒H1相关磷酸酶(VHR)及其突变体进行稳态动力学参数和竞争性抑制常数Ki的测定, 结果显示上述Arg130和Arg158突变体的kcat/Km值都较野生型有大幅度下降, 而Ki值有明显上升, 表明130和158位的精氨酸是VHR活性所必需, 而且可能与底物上带负电的磷酸基团结合有关. 另外, 单突变体R130L 和双突变体R130L/S131A之间的kcat值相差很小, 提示Arg130单点突变后可能破坏了Ser131与Cys124间的氢键. 再者, R125L、R130L和R158L突变体都降低了砷酸盐结合亲和性, 暗示这3个精氨酸残基侧链上的正电荷可能有助于底物与酶的结合.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	施蕴渝	中国科学技术大学生命科学学院结构生物学重点实验室	12	190	5.0	12.0
2	汪迎华	中国科学技术大学生命科学学院结构生物学重点实验室	1	0	0.0	0.0
3	曾王勇	中国科学技术大学生命科学学院结构生物学重点实验室	1	0	0.0	0.0