水痘-带状疱疹病毒糖蛋白I基因在昆虫细胞中的表达及纯化

• 作者: 卢晓燕 张鹏飞 章以浩 郭存三 郭立征 项金忠
• 来源期刊: 中华预防医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 疱疹病毒3型,人 糖蛋白类 杆状病毒科 基因表达
• 年，卷（期）: 2003,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 442-445
• 页数: 4页
• 分类号: R37
• 字数: 3309字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0253-9624.2003.06.013

摘要

目的将北京水痘-带状疱疹病毒(VZV)84-7株克隆糖蛋白I(gpI)基因在杆状病毒-昆虫细胞表达系统中表达,并对其表达产物进行纯化.方法采用PCR方法从VZV DNA中扩增gpI全基因序列,并将其插入杆状病毒转移质粒pBacPAK9中,获得重组转移质粒pBacVZVgpI,对pBacVZVgpI中的插入基因进行测序.重组转移质粒与线性杆状病毒BacPAK6 DNA(Bsu36I digested)共转染Sf 9昆虫细胞,获得重组病毒BacPAK-gpI.通过亲和层析纯化重组蛋白,并检测其抗原性.结果 PCR扩增得到gpI基因,测序结果表明克隆的外源基因正确.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫印迹(western-blot)方法证明gpI基因在昆虫细胞中获得表达,表达产物在培养72 h达到高峰,重组蛋白的相对分子质量约为58 000和70 000,与理论值相符,蛋白质加工与天然蛋白类似.动物实验结果表明,重组蛋白具有较好的免疫原性,可刺激小鼠产生中和抗体.SDS-PAGE检测纯化的重组蛋白,纯度达80%.纯化蛋白经western-blot和ELISA检测后显示,具有特异的抗体结合活性.结论应用昆虫细胞表达水痘-带状疱疹病毒gpI基因,可为水痘-带状疱疹病毒抗原定量分析、糖蛋白ELISA的研制和制备亚单位疫苗提供基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭存三		4	39	2.0	4.0
2	卢晓燕		2	2	1.0	1.0
3	郭立征		1	0	0.0	0.0
4	项金忠		1	0	0.0	0.0
5	章以浩		2	1	1.0	1.0
6	张鹏飞		1	0	0.0	0.0