CpTI蛋白在大肠杆菌中的高效融合表达及其纯化与活性测定

• 作者: 常团结 朱祯 杨丽琛 杨晓光 陈宛新
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 豇豆胰蛋白酶抑制剂 遗传修饰食品 安全性评价 融合表达 活性测定
• 年，卷（期）: 2003,（1）
• 所属期刊栏目: 蛋白质工程
• 页码范围: 63-68
• 页数: 6页
• 分类号: Q392.11
• 字数: 5932字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2003.01.012

摘要

豇豆胰蛋白酶抑制剂 (Cowpea Trypsin Inhibitor) 基因 (CpTI) 因其抗虫谱广及不易耐受等优点在植物基因工程中得到广泛应用.为进行遗传修饰食品(Genetically modified foods, GMF)中所含CpTI基因表达产物的安全性评价,我们需要在体外微生物体系中获得大量的CpTI蛋白.采用pGEX融合蛋白表达系统,将CpTI与GST的编码序列在大肠杆菌BL21中进行融合表达,表达产物达到菌体总蛋白的40%.经一步Glutathione Sephrose 4B亲和纯化,融合蛋白GST-CpTI纯度达到90%以上.将Thrombin蛋白酶与融合蛋白过夜作用,可获得切掉了GST标签的CpTI蛋白.活性测定显示GST-CpTI及CpTI蛋白均具有明显的胰蛋白酶抑制剂活性.用纯化的融合蛋白免疫家兔还可诱导产生高效价的抗体,经ELISA检测抗体滴度>1∶20000.Western Blotting 实验显示,无论是菌体超声裂解后总蛋白中的CpTI蛋白或是经纯化后的CpTI蛋白均可与自制的抗体发生特异性结合.这为进一步进行CpTI蛋白的安全性评价工作奠定了良好基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱祯	中国科学院遗传研究所植物遗传分子操作开放实验室	135	3063	32.0	48.0
2	杨丽琛	中国疾病预防控制中心营养与食品安全所卫生部微量元素营养重点实验室	45	369	11.0	17.0
3	杨晓光	中国疾病预防控制中心营养与食品安全所卫生部微量元素营养重点实验室	196	3171	30.0	48.0
4	常团结	中国科学院遗传研究所植物遗传分子操作开放实验室	21	481	12.0	21.0
5	陈宛新	中国科学院遗传研究所植物遗传分子操作开放实验室	8	108	6.0	8.0