结核分支杆菌ESAT-6真核表达质粒的构建及蛋白表达的鉴定

• 作者: 史小玲 张建军 王明勇 蒋玉凤 邓存良 钟森
• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 早期分泌性抗原靶 转染 真核表达质粒 表达蛋白
• 年，卷（期）: 2003,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 65-68,47
• 页数: 5页
• 分类号: R378.91
• 字数: 4189字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2003.05.017

摘要

目的用6kDa早期分泌性抗原靶蛋白(ESAT-6)基因构建真核表达重组质粒pcDNA3.1(+)-ESAT-6,并鉴定其在真核细胞(COS-7)中的蛋白表达.方法以结核杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,用PCR对ESAT-6基因进行扩增,将扩增的产物连接于测序载体pUCm-T上,经测序反应确定无误后,再将PCR反应产物克隆于真核表达载体pcDNA3.1(+)上.并用脂质体介导真核表达重组质粒pcDNA3.1(+)-ESAT-6转染真核细胞COS-7,72 h后,通过SDS-PAGE和免疫印迹鉴定ESAT-6基因表达的蛋白.结果用结核杆菌基因ESAT-6构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-ESAT-成功,通过SDS-PAGE证明重组质粒转化的细胞内有一分子量6kDa的特异蛋白,免疫印迹证明该6kDa蛋白能与抗ESAT-6单克隆抗体反应.结论结核杆菌早期分泌性蛋白ESAT-6真核表达重组质粒成功构建,该质粒转染的细胞能够产生、分泌结核杆菌早期分泌性蛋白ESAT-6.