阻断CD40/CD40L相互作用延长移植物抗宿主病小鼠存活时间

• 作者: 侯春梅 刘荷中 唐佩弦 李秀森 毛宁 沈倍奋
• 来源期刊: 中国临床药理学与治疗学
• 关键词: 生物医学工程学 CD40-Ig 融合蛋白 移植物抗宿主病
• 年，卷（期）: 2003,（1）
• 所属期刊栏目: 研究原著
• 页码范围: 6-10
• 页数: 5页
• 分类号: R318
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-2501.2003.01.002

摘要

目的:克隆表达人CD40-Ig融合蛋白,并在小鼠移植物抗宿主病(GVHD)模型中研究利用其阻断CD40/CD40L相互作用的保护性效果.方法:利用RT-PCR技术自人Daudi细胞系中克隆CD40基因胞外区,并插入含有人IgG1 Fc段基因的pIG1载体中,构建携带CD40-Fc融合基因的瞬时表达载体转染COS-7细胞,间接夹心ELISA法检测CD40-Ig融合蛋白的表达.再将CD4-Fc融合基因连接入pcDNA3.1的相应位点构建稳定表达载体转染CHO细胞,筛选分泌CD40-Ig融合蛋白的阳性重组CHO细胞并进行无血清大规模培养,收获培养上清利用Protein A亲和层析法纯化融合蛋白.SDS-PAGE、Western blot和配基结合实验鉴定CD40-Ig的性质.将C57BL6/J(H-2b)小鼠的脾细胞经尾静脉注射入亚致死剂量照射的BALB/c(H-2d)小鼠体内建立急性GVHD模型,通过体内注射CD40-Ig融合蛋白评价其对急性GVHD小鼠的保护效果.结果:按上述方法分别构建了哺乳动物表达载体pIG/40Ig和p3.1/40Ig.ELISA 和Western blot确定在COS-7和CHO细胞中表达了CD40-Ig融合蛋白.SDS-PAGE结果显示该蛋白具有通过二硫键结合的二聚体结构并以同源二聚体的形式存在.纯化的CD40-Ig可与CD40L结合.体内应用CD40-Ig融合蛋白治疗可延缓小鼠GVHD病情发展并显著延长小鼠的平均存活时间.结论:CD40/CD40L相互作用在GVHD的病理过程中可能扮演了十分重要的角色,提示人CD40-Ig融合蛋白在临床预防和治疗GVHD方面的巨大应用潜力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈倍奋	军事医学科学院基础医学研究所	213	1497	18.0	31.0
2	侯春梅	军事医学科学院基础医学研究所	39	357	7.0	18.0
3	唐佩弦	军事医学科学院基础医学研究所	24	313	10.0	17.0
4	毛宁	军事医学科学院基础医学研究所	72	529	12.0	20.0
5	李秀森	军事医学科学院基础医学研究所	25	195	7.0	13.0
6	刘荷中	军事医学科学院基础医学研究所	20	81	5.0	7.0