弓形虫微线体蛋白1部分基因的克隆、测序及表达

• 作者: 刘传爱 张愉快 杨慧龄 梁瑜 肖建华
• 来源期刊: 中华预防医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 弓形虫属 细胞黏附分子 克隆,分子
• 年，卷（期）: 2003,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 29-32
• 页数: 4页
• 分类号: R38
• 字数: 3304字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0253-9624.2003.01.009

摘要

目的构建弓形虫ZS2株pWR450-1-微线体蛋白1(MIC1)原核表达重组质粒,对MIC1基因进行序列测定,并在不同大肠杆菌中表达.方法用PCR技术从弓形虫ZS2株的基因组DNA中扩增编码MIC1的基因片段,酶切,连接,重组入pWR450-1表达载体,再经含氨苄培养基筛选、酶切、PCR鉴定,进行序列测序后转化大肠杆菌TG-1、JM109(DE3)和DH5α.在不同菌体浓度及不同剂量异丙基-β-D-硫代半乳糖诱导下,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定MIC1融合蛋白的表达.结果从ZS2株基因组DNA中扩增出特异的MIC1基因片段,克隆后获得pWR450-1/MIC1重组质粒,测序结果表明,MIC1这部分基因与弓形虫RH株相应基因序列完全一致,高度保守.该基因可在不同大肠杆菌中表达相对分子质量约70 000的融合蛋白.结论构建了弓形虫ZS2株pWR450-1-MIC1重组质粒,为研究MIC1的结构与功能奠定了基础.