猪胚胎干细胞培养、分离和传代

• 作者: 冯书堂 王占贺 王端云 董晓 郑行
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 胚胎干细胞 生长因子
• 年，卷（期）: 2003,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 263-267
• 页数: 5页
• 分类号: S82
• 字数: 4122字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2003.03.010

摘要

利用五指山小型猪近交系不同发育阶段的早期胚胎为材料,探索猪胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES)培养、分离、传代的影响因素,以选择猪胚胎干细胞建系的适宜条件.收集五指山猪第5～10 d胚胎(配种当天记为0 d),以STO细胞[STO细胞是来自SIM小鼠(S)胚胎对硫代鸟嘌呤(thioguanine,T)和乌本苷(ouabain,O)有抗性的成纤维细胞系]为饲养层,分别采用两种培养液:杜氏培养液(Dulbecco's modified eagle medium,DMEM)+10%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)+10%新生牛血清(newborn bovine serum,NBS)+1 000IU/mL白血病抑制因子(1eukemia inhibitory factor,LIF)+30 ng/mL干细胞生长因子(stem cell growthfactor,SCF)+20 ng/mL碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)或DMEM+10%NBS+10%FBS+1 000IU/mL LIF+30 ng/mL SCF.比较发现,培养液中是否加入bFGF对胚胎干细胞的培养无显著影响;实验共收集胚胎124枚,其中D5～6胚胎18枚,胚胎贴壁率为68.8%,内细胞团出现率为6.3%,未能传代;收集D7孵化囊胚27枚,贴壁率为100%,内细胞团出现率为38.9%,传代1次失败;D9胚胎18枚,贴壁率为100%,传代后ES细胞生长较缓慢;收集D10胚胎52枚,胚胎贴壁率为100%,传代率为100%,传代后可出现ES细胞克隆点;实验过程中比较了胚径对干细胞培养的影响,发现胚径越大,培养效果越好,胚径大于100μm,分离ICM后出现干细胞集落成功率达100%,并得到了AP染色呈阳性的传4代的ES细胞集落.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	冯书堂	中国农业科学院畜牧研究所	71	637	15.0	20.0
2	郑行	中国农业大学生物学院	11	101	6.0	10.0
3	董晓	中国农业科学院畜牧研究所	6	82	5.0	6.0
7	王占贺	中国农业科学院畜牧研究所	11	250	10.0	11.0
9	王端云	中国农业科学院畜牧研究所	5	165	5.0	5.0