橙色荧光蛋白--绿色荧光蛋白GFPxm的改造

• 作者: 夏宁邵 张军 李少伟 李少菁 程通 管宝全 罗文新 陈敏
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 绿色荧光蛋白 橙色荧光蛋白 突变型 荧光光谱 荧光强度
• 年，卷（期）: 2003,（1）
• 所属期刊栏目: 蛋白质工程
• 页码范围: 56-62
• 页数: 8页
• 分类号: Q754
• 字数: 6110字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2003.01.011

摘要

最近报道了从大型多管水母中分离出新的gfp基因.经大肠杆菌表达并纯化出的绿色荧光蛋白(GFPxm)具有476nm的激发峰和496nm的发射峰,但是只能在低温下成熟的缺点限制了它的应用.这里进一步报道GFPxm的12种突变型.在大肠杆菌中的表达结果表明,有7种突变型在37℃条件下产生高的荧光强度.在25、32和37℃条件下表达6 h,GFPxm16、GFPxm18和GFPxm19的相对荧光强度均高于增强型绿色荧光蛋白(EGFP),而GFPxm16和GFPxm163在42℃高温表达时仍能保持高的荧光强度.这7种突变型中的4种在哺乳动物细胞中已获得良好表达.此外,有6种突变型的荧光光谱红移,目前所达到的最长激发峰为514nm、最长发射峰为525nm.另外有3种突变型具有包括紫外在内的两个激发峰,1种突变型只有单一的紫外激发峰.首次报道具有橙色荧光的突变型OFPxm,它的激发峰为509nm、发射峰为523nm.523nm属于黄绿色,但肉眼看到的蛋白为橙色.OFPxm在高温下可得到高水平表达且很好地成熟,但是因为低的量子产率而荧光强度相对较低.