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摘要:
目的:采用细菌内同源重组法构建含人内皮抑素基因的重组腺病毒Ad-CMV-hEn.方法:将hEn基因自pCA13-hEn质粒中酶切下来,亚克隆至腺病毒穿梭质粒中,形成转移质粒pAdtrack-CMV-hEn,并用PmeⅠ线性化后与腺病毒基因组质粒pAdeasy共转化大肠杆菌BJ5183,抽提重组体腺病毒基因组质粒DNA,PacⅠ酶切后在293细胞中包装成腺病毒颗粒.采用PCR方法对重组体腺病毒进行鉴定,同时测定了病毒滴度.并采用RT-PCR检测感染腺病毒的胃癌细胞内有无hEn mRNA的转录.结果:由pAdtrack-CMV-hEn和pAdeasy共转化大肠杆菌BJ5183后,可得到阳性重组体细菌克隆,包装完成的腺病毒经PCR检测表明已含有hEn基因.纯化所得腺病毒滴度约为2.4×1011 pfu/ml.RT-PCR证实在感染重组体腺病毒Ad.CMV-hEN的细胞中有相应mRNA的转录.结论:细菌内同源重组法是一种高效、简便、快捷的重组体腺病毒载体制备方法.所构建的Ad-CMV-hEn在体外能有效转录相应的mRNA.
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文献信息
篇名 细菌内同源重组构建含人内皮抑素基因腺病毒及在胃癌细胞中的体外转染实验
来源期刊 中国临床医学 学科 医学
关键词 腺病毒载体 内皮抑素 胃癌 基因治疗 细菌
年,卷(期) 2003,(2) 所属期刊栏目 论著
研究方向 页码范围 139-142
页数 4页 分类号 R73
字数 3038字 语种 中文
DOI 10.3969/j.issn.1008-6358.2003.02.005
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 秦新裕 复旦大学附属中山医院普外科 210 2042 26.0 39.0
2 刘新垣 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞研究所 62 327 10.0 14.0
3 邹卫国 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞研究所 7 46 3.0 6.0
4 阴忆青 复旦大学附属中山医院普外科 14 167 7.0 12.0
5 齐荣 上海交通大学生命科学技术学院 2 8 1.0 2.0
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研究主题发展历程
节点文献
腺病毒载体
内皮抑素
胃癌
基因治疗
细菌
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
中国临床医学
双月刊
1008-6358
31-1794/R
大16开
上海市医学院路136号 复旦大学附属中山医院内
4-636
1994
chi
出版文献量(篇)
6978
总下载数(次)
7
总被引数(次)
33068
相关基金
国家自然科学基金
英文译名:the National Natural Science Foundation of China
官方网址:http://www.nsfc.gov.cn/
项目类型:青年科学基金项目(面上项目)
学科类型:数理科学
国家高技术研究发展计划(863计划)
英文译名:The National High Technology Research and Development Program of China
官方网址:http://www.863.org.cn
项目类型:重点项目
学科类型:信息技术
论文1v1指导