大肠杆菌碱性磷酸酶的体外定向进化研究

• 作者: A.E.G.CASS 张先恩 张治平 张用梅 徐卉芳
• 来源期刊: 生物化学与生物物理进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 定向进化 易错聚合酶链反应 大肠杆菌碱性磷酸酶 催化活力
• 年，卷（期）: 2003,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 89-94
• 页数: 6页
• 分类号: Q58|Q81
• 字数: 5353字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3282.2003.01.017

摘要

大肠杆菌碱性磷酸酶(E.coli alkaline phosphatase, EAP, EC 3.1.3.1)是一个非特异性二聚体磷酸单酯酶. 采用易错聚合酶链反应(error prone PCR)的方法,在原有高活力突变株的基础上,对EAP远离活性中心催化三联体的区域进行定向进化,经两轮error prone PCR,获得催化活力较亲本D101S突变株提高3倍、较野生型酶提高35倍的进化酶4-186,并对该酶的催化动力学特征进行了分析. 进化酶基因的DNA测序表明4-186含两个有义氨基酸置换:K167R和S374C,二者既不位于底物结合位点,也不位于酶的金属离子结合位点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张先恩	中国科学院武汉病毒研究所	36	723	15.0	26.0
2	张治平	中国科学院武汉病毒研究所	10	77	4.0	8.0
3	张用梅	中国科学院武汉病毒研究所	9	140	6.0	9.0
4	徐卉芳	中国科学院微生物研究所	2	99	2.0	2.0