复合探针荧光定量PCR方法的建立

• 作者: 张敏丽 王升启 王小红 陈苏红
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 复合探针 荧光定量PCR 荧光能量转移
• 年，卷（期）: 2003,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 127-130
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3133字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2003.02.009

摘要

为了对特定基因进行实时检测,根据荧光能量转移(FRET)原理,设计及合成了一种新的FRET复合探针,该探针由一条长的荧光杂交探针和短的淬灭探针构成,其中荧光探针5′端接一荧光素分子,3′端接一延伸阻断分子磷酸,淬灭探针3′端连接一个淬灭分子对甲基红,淬灭探针与荧光探针5′端互补,无模板时,该探针杂交形成复合探针,无荧光产生,当有模板时,荧光探针与模板杂交,荧光不能被淬灭,产生的荧光与模板量成正比.根据复合探针的反应原理,研究了该探针的FRET性质及影响因素包括淬灭探针及扩增片段长度、荧光探针与淬灭探针的合适比例及镁离子浓度.实验结果显示淬灭探针及扩增片段长度对复合探针的作用有明显的影响,本实验采用淬灭探针长21个核苷酸,扩增片段长127 bp,荧光探针与淬灭探针的合适比例为1:1,镁离子浓度为3 mmol/L,可获得最佳的反应体系;该复合探针合成简单,淬灭彻底,具有良好的准确性与特异性,敏感性达102拷贝,并具有较宽的动力学定量范围,可对102～109拷贝范围内的待检样品进行准确的定量.复合探针技术可应用于病毒感染水平、转基因拷贝数及单核苷酸多态性等检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王升启	军事医学科学院放射医学研究所	315	3297	28.0	41.0
2	张敏丽	军事医学科学院放射医学研究所	38	388	12.0	18.0
3	陈苏红	军事医学科学院放射医学研究所	44	306	9.0	15.0
4	王小红	军事医学科学院放射医学研究所	11	259	5.0	11.0