小鼠胚胎干细胞中RNA干涉现象

• 作者: 丁明孝 孟国良 尚克刚 张俊争 汤富酬 薛友纺 赵文宁
• 来源期刊: 生物化学与生物物理学报
• 学科: 生物学
• 关键词: RNA干涉 ES细胞 双链RNA 反义RNA
• 年，卷（期）: 2003,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 238-246
• 页数: 9页
• 分类号: Q7
• 语种: 英文

摘要

报道了不同品系小鼠胚胎干细胞(ES细胞)系MESPU13、 B3和R1中存在的RNA干涉(RNAi)现象.应用脂质体法, 将转录绿色荧光蛋白(GFP)基因双链RNA(dsRNA)的载体(pdsGFP)转染GFP标记的ES细胞, dsRNA的瞬时表达可引起ES细胞中的RNAi效应, 即质粒转录的GFP基因的dsRNA能够显著降低ES细胞内相应的外源GFP基因的表达; 同时, 用电穿孔转染法将线性化的pdsGFP-puro导入ES细胞中, 筛选后, 在30%左右的抗性克隆中GFP表达量明显降低, 少数细胞内的干涉效率达到RT-PCR检测不到的程度.在此基础上, 构建了可转录ES细胞特异标记基因OCT-4基因片断dsRNA的载体, 经基因打靶和抗性筛选得到了稳定整合的ES细胞克隆, 随机扩增了51个克隆, 并对其中的48个阳性克隆进行了PCR半定量检测, 结果显示: 在11个ES细胞克隆中具有显著的RNAi效应, 干涉效率达到RT-PCR检测不到的程度.这一结果表明, 应用RNAi在不同品系ES细胞中研究哺乳动物及人的基因功能是可行的.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	丁明孝	北京大学生命科学学院	25	215	8.0	14.0
2	汤富酬	北京大学生命科学学院	16	288	7.0	16.0
3	薛友纺	北京大学生命科学学院	13	286	8.0	13.0
4	尚克刚	北京大学生命科学学院	17	331	9.0	17.0
5	孟国良	北京大学生命科学学院	9	208	6.0	9.0
6	张俊争	北京大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
7	赵文宁	北京大学生命科学学院	2	2	1.0	1.0