牛肠激酶轻链基因的克隆及其在大肠杆菌中的融合表达

• 作者: 孙彦 甘一如 黄鹤
• 来源期刊: 遗传
• 学科: 生物学
• 关键词: 牛肠激酶轻链 克隆 表达 自催化切割
• 年，卷（期）: 2003,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 685-690
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 5294字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0253-9772.2003.06.014

摘要

为克隆表达牛肠激酶(enterokinase)轻链(EKL)编码基因,以期应用于融合蛋白的切割与纯化,从市售北方黄牛十二指肠组织中提取总RNA,以R-PCR方法扩增其cDNA片段,将此片段克隆于pUCmT载体中,经过特异性限制性内切酶酶切分析片段正确后,进行全序列分析.结果表明,克隆的cDNA与GenBank上的序列相比完全一致,得到了编码正确的牛肠激酶轻链基因全序列.随后,将目的基因片段插入pET39b中,构建了融合型表达载体pET39b-EKL,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达.所获得的pET39b-EKL经过酶切鉴定和测序,证实其插入方向、读码框架正确,所表达重组蛋白经SDS-PAGE分析,相对分子量为65 kDa,表达量达28%,通过镍亲和层析纯化得到融合蛋白DsbA-rEKL的单一条带.该粗酶经脱盐后在适宜的缓冲体系中21℃温育过夜,显示出较高的自催化切割活性,为进一步进行重组牛肠激酶活性的研究及应用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙彦	天津大学生物工程系	82	902	16.0	26.0
2	黄鹤	天津大学生物工程系	21	140	8.0	11.0
3	甘一如	天津大学生物工程系	42	391	13.0	17.0