CTLA4Ig重组腺病毒载体的构建与体外表达

• 作者: 李树浓 邓宇斌 郭小荑 陆才生
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: T淋巴细胞,细胞毒性 免疫球蛋白类 腺病毒载体 基因疗法
• 年，卷（期）: 2003,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 585-589
• 页数: 6页
• 分类号: R392.4
• 字数: 5614字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2003.05.003

摘要

目的:构建含有CTLA4Ig基因的重组腺病毒载体,为下一步在动物模型体内表达和基因治疗提供基础.方法: 自行设计一对分别含有BglⅡ及HindⅢ酶切位点的CTLA4Ig基因上下游引物,以质粒PCDNA3.0/CTLA4Ig为模板,通过PCR扩增获得CTLA4Ig基因全部序列.片段回收以后经BglⅡ及HindⅢ双酶切,定向插入到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV的启动子下游BglⅡ及HindⅢ位点之间,获得重组质粒pAdTrack-CTLA4Ig.通过BglⅡ/HindⅢ双酶切、PCR及插入片段测序鉴定后,将正确重组体pAdTrack-CTLA4Ig与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化BJ5183细菌.同源重组后用选择性培养基筛选阳性克隆,提取质粒用脂质体介导转染293细胞,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达及PCR扩增目的基因等方法鉴定重组的腺病毒.结果:成功构建了含有CTLA4Ig基因的重组腺病毒,病毒滴度为1.65×1012PFU/L. 结论: 该重组腺病毒的构建为下一步研究其在哺乳动物细胞内表达、研究CTLA4Ig的生物学活性及移植排斥、自身免疫病的基因治疗提供了一定的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邓宇斌	中山大学中山医学院病理生理学教研室	82	491	11.0	15.0
2	郭小荑	中山大学中山医学院病理生理学教研室	3	14	2.0	3.0
3	李树浓	中山大学中山医学院病理生理学教研室	38	248	9.0	14.0
4	陆才生	中山大学附属第三医院风湿科	16	76	6.0	8.0