抗人组织金属蛋白酶抑制剂-1核酶的体外制备和活性鉴定

• 作者: 吴建明 宋宇虎 林子豪 江华 汪滋民 金由辛
• 来源期刊: 生物化学与生物物理学报
• 学科: 生物学
• 关键词: TIMP-1 核酶 转录 克隆
• 年，卷（期）: 2003,（4）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 387-390
• 页数: 4页
• 分类号: Q5
• 语种: 英文

摘要

研究了特异切割入瘢痕组织中组织金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinases-1,TIMP-1)的锤头状核酶,测定了其体外切割活性.制备特异切割TIMP-1的U6 snRNA嵌合型核酶基因克隆.TIMP-1 mRNA基因片段克隆至T载体.用体外转录法大量制备以[α-32P]UTP标记的核酶及靶RNA,进行体外切割实验.结果表明核酶:底物=1:1时,活性的U6 snRNA嵌合型核酶(U6Rz358)在50℃具有最佳切割活性,切割效率为76.34%;37℃时,切割效率为55.21%.50℃时,Km=39.6 nmol/L,kcat=0.21 min-1;而点突变型核酶U6Rz358m没有切割活性.制备的U6-Rz358有良好的特异切割活性,有望在瘢痕成纤维细胞内抑制入TIMP-1的表达.