摘要:
目的:用β-e sci n在豚鼠心室肌细胞建立穿孔膜片箝技术(PPR),并记录L-型钙电流(ICa,L),与传统的全细胞记录(WCR)模式相比较.方法:用酶消化法分离单个心室肌细胞,将β-escin配在电极内液中穿孔心室肌细胞膜形成PPR模式.用WCR及PPR技术记录心室肌细胞ICa,L.结果:β-escin 20,25,30 μmol/L可在心室肌细胞膜穿孔形成PPR模式,用β-escin 25 μmol/L成功率最高(16/17,94%).用PPR模式记录的ICa,L其衰减明显比WCR方式记录的慢,ICa,L幅值在WCR形成后20 min减小36%,而在PPR形成后30 min仅缓慢减小8%.在两种模式下,ICa,L的I-V曲线,激活和失活曲线无显著差异.在PPR模式下,ICa,L的失活速率比在WCR模式下慢,在-20 mV-+10 mV电压下,其快失活相时间常数(τf)比WCR长(n=6,P<0.05),在-10 mV-+10 mV电压下,其慢失活相时间常数(τs)也比WCR长(n=6,P<0.05).在两种方式下,ICa,L的激活速率无显著差异.结论:用β-escin 25 μmol/L在豚鼠心室肌细胞能得到较稳定的PPR模式,此方法可以用于在普通的WCR模式下衰减较明显的电流如L-型钙电流的记录.