应用酵母双杂交系统发现hALR与Na+,K+-ATPase间的相互作用

• 作者: 佟明华 姚汝华 孔祥平 陈思强
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 肝再生增强因子 酵母双杂交 Na+,K+-ATPase
• 年，卷（期）: 2003,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 310-313
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3465字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2003.03.006

摘要

目的:采用酵母双杂交系统寻找与人肝再生增强因子(hALR)相互作用的蛋白质,探讨ALR的作用机理.方法:构建hALR 诱饵质粒pGBKT7-hALR,醋酸锂法转化AH109酵母菌,转化菌在SD/-Trp-His培养基上培养及滤纸法β一半乳糖苷酶活性检测排除自身激活作用后,与人肝cDNA文库质粒预转化的酵母菌Y187进行接合试验,接合产物在QDO培养基上筛选,阳性克隆进一步在含X-α-Gal的QDO平板上鉴定,X-α-Gal活性呈阳性的克隆,进行PCR及酶切鉴定排除完全相同克隆,进一步进行回交试验排除假阳性,对阳性克隆进行序列测定和生物信息学分析.结果:得到数个阳性克隆,序列分析结果表明其中1个阳性克隆是Na+,K+-ATPase β亚基部分基因,长669 bp,3′端非编码区224 bp,编码区长445 bp,编码Na+,K+-ATPase β亚基C端的147个氨基酸残基.结论:应用酵母双杂交系统筛选出Na+,K+-ATPase与hALR具有相互作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姚汝华	华南理工大学生物工程系	86	1231	22.0	29.0
2	佟明华	解放军第458医院传染病中心	18	53	4.0	6.0
3	孔祥平	解放军第458医院传染病中心	46	182	7.0	11.0
4	陈思强	华南理工大学生物工程系	5	14	3.0	3.0