应用甲基化CpG岛扩增法结合代表性差异分析筛选结肠癌相关的甲基化DNA片段

• 作者: 朱益民 来茂德 林洁 黄琼
• 来源期刊: 中华医学遗传学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 甲基化CpG扩增 代表性差异分析 DNA甲基化 结直肠癌
• 年，卷（期）: 2003,（5）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 425-429
• 页数: 5页
• 分类号: R73
• 字数: 4105字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1003-9406.2003.05.014

摘要

目的研究结肠癌癌旁粘膜和正常结肠组织间DNA甲基化分布的差异以及甲基化在结肠癌发生中的作用.方法用甲基化CpG岛扩增(methylated CpG islands amplification, MCA)法富集基因组DNA甲基化序列,以癌旁粘膜DNA甲基化富集产物为检测子,正常结肠组织的甲基化富集产物为驱赶子进行代表性差异分析(representational difference analysis, RDA)获得DNA甲基化差异片段,经克隆、测序获得碱基序列.用生物信息学分析这些序列与相关基因结构的关系.结果获得25个不同的差异甲基化序列,位于相关基因的5′端、外显子、内含子和3′端.其中1A01片段位于CECR7基因的第1外显子和LOC256866基因的5′端及第1外显子;1A12片段位于GR6基因的第1外显子前204 bp处.符合DNA甲基化对基因转录的调控规律.以1A12片段为探针,点杂交分析表明,该探针与4轮RDA和检测子均有杂交信号,而与驱赶子无杂交信号.结论结肠癌癌旁组织和正常结肠组织的DNA甲基化存在差别,用MCA结合RDA方法可以有效分析这两种不同组织的甲基化分布差异.