胎鼠性别决定区蛋白基因快速检测

• 作者: 刘革修 张洹
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 性别决定区蛋白基因 小鼠 胚胎
• 年，卷（期）: 2003,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 622-626
• 页数: 6页
• 分类号: Q782
• 字数: 1683字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2003.05.012

摘要

目的:为了将雄性胎鼠组织细胞移植进入雌性受体鼠,Y染色体特异的性别决定区蛋白基因(sex determining region protein, Sry)作为常用的遗传标志需要在细胞分离前快速检测;为了检测孕14 d胎鼠的Sry基因,我们建立了一种快速的PCR方法.基于C57BL/6J小鼠Sry基因序列,我们设计了特异检测引物,并优化了PCR的反应条件包括引物和循环参数等.方法和结果: 模板的制备时间约30 min.取约1 mg胚胎组织,以10 mmol/L Tris 10 mmol/L EDTA pH 8.0 缓冲液洗涤2次,然后以200 μL裂解液(20 mg/L proteinase K, 0.5% NP-40, and 0.05% Tween 40)悬浮,再在60℃孵育15 min以消化蛋白,95℃以上5 min灭活蛋白酶K.取5-10 μL作为模板.PCR反应总体积为50 μL,使用两套引物同时扩增,一套扩增Sry目的基因片段,另一套扩增IL-3基因片段作为内对照.扩增时间为1.5 h.扩增产物10-15 μL采用2.5%-3%的琼脂糖凝胶在12-15 V/cm的电压下电泳.10 min即可观察电泳结果.根据引物设计判断结果,Sry目的基因片段为444 bp、IL-3基因片段为649 bp.操作约10个胚胎总时间小于3.5 h.PCR扩增的特异性与特异探针荧光原位杂交结果一致. 结论: 该PCR方法为检测胎鼠性别决定区蛋白基因的快速、简单、敏感及准确的方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张洹	暨南大学医学院血液研究所	219	1146	17.0	21.0
2	刘革修	暨南大学医学院血液研究所	89	330	10.0	11.0