非病毒载体H1s-EGFc的构建及其功能的初步研究

• 作者: 卢圣栋 司徒慧芬 李勇 杨奎 洪梅 路金芝 郭蕾 陈伟京
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 融合蛋白类,bcr-abl 表皮生长因子受体 基因治疗
• 年，卷（期）: 2003,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 848-852
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4220字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0376-2491.2003.10.011

摘要

目的探讨和构建一种用于靶向性基因治疗的非病毒载体.方法采用基因工程的方法构建H1s-EGFc融合蛋白表达载体,在毕赤酵母表达系统中获得分泌表达的融合蛋白.使用阴离子交换柱及分子筛进行纯化.制备H1s-EGFc融合蛋白与pKG杀伤基因表达重组体的复合物.选用表皮生长因子受体高表达的HeLa细胞及表皮生长因子受体不表达的Jurkat细胞进行复合物特异性杀伤活性测试. 结果构建并表达了H1s-EGFc融合蛋白,所获融合蛋白纯度可达90%以上.该融合蛋白能够有效地包装杀伤基因表达载体,将其导入表皮生长因子受体特异性表达的肿瘤细胞中,达到靶向性杀伤作用,当融合蛋白/杀伤基因复合物使用剂量分别是3、6、9 μg/ml时,杀伤率分别为30.6%、36.2%和58.1%;而对表皮生长因子受体不表达的细胞无杀伤作用.结论融合蛋白H1s-EGFc能够有效地用于功能基因的包装及转运,可以作为非病毒载体应用于恶性肿瘤的靶向性基因治疗.