用基因重组α-半乳糖苷酶进行B→O血型改造

• 作者: 任会明 兰炯采 刘泽澎 季守平 宫锋 曹琼 李素波 杨军 章扬培 贾延军 高新
• 来源期刊: 科学通报
• 学科: 生物学
• 关键词: B → O血型改造 重组α-半乳糖苷酶
• 年，卷（期）: 2003,（1）
• 所属期刊栏目: 简报
• 页码范围: 43-47
• 页数: 5页
• 分类号: Q5
• 字数: 4742字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0023-074X.2003.01.012

摘要

α-半乳糖苷酶是进行B→O血型改造的工具酶. 采用RT-PCR方法, 从中国海南Catimor咖啡豆中克隆了全长1.1 kb的α-半乳糖苷酶cDNA, 并构建了其表达载体. 电穿孔法将载体导入毕赤酵母GS115细胞, 筛选出重组(-半乳糖苷酶菌株. 离子交换层析纯化出α-半乳糖苷酶, 酶比活性从15 U/mg 提高到28.14 U/mg. 进一步鉴定了酶的生物化学性质, 其Km = 0.275, Vmax = 0.014 mmol@L-1@min-1. 据此确定了B→O血型改造的条件: pH 5.5~5.6, 每毫升红细胞使用100 U α-半乳糖苷酶, 26℃, 4 h. 经动物输血实验初步证明, 酶解反应后的通用O型血(enzymatically converted group O red blood cells, ECORBC)是安全的.