腺病毒5型E1A在毕赤酵母中的表达及对肿瘤细胞生长的抑制作用

• 作者: 刘玉英 千新来 周小山 李艳春 杨军 王争 赵清正 马业伟 高新
• 来源期刊: 科学通报
• 学科: 医学
• 关键词: E1A蛋白 酵母表达系统 细胞周期 肿瘤抑制
• 年，卷（期）: 2003,（5）
• 所属期刊栏目: 简报
• 页码范围: 443-446
• 页数: 4页
• 分类号: R73
• 字数: 4498字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0023-074X.2003.05.009

摘要

腺病毒5型E1A(Ad5E1A)作为一个抑癌基因, 由于具有较强抑癌作用及显著的化放疗增敏作用而受到人们的关注. 但由于它能整合到宿主细胞基因组中长期表达, 并能使Rb基因失活, 使动物细胞永生化等而引起人们的担心. 为了避免E1A在基因治疗中存在的问题, 设想以E1A蛋白进行探索. 首先构建了E1A真核表达载体(pPIC9/E1A), 转化毕赤酵母(GS115), 筛选高表达重组菌株. 经摇瓶试验, 甲醇诱导表达3 d后, 分泌型的E1A蛋白经HiTrap Q 和HiTrap SP两步柱层析, 获得了较高纯度的E1A蛋白, 并经SDS-PAGE 和Western blot 鉴定. E1A蛋白经Chariot介导能顺利进入细胞, 并大部分定位在细胞核, 使LN686细胞发生明显的G2/M期阻滞, 体外能显著抑制LN686肿瘤细胞生长. 为利用E1A蛋白在肿瘤治疗中应用的可能性提供了实验依据.