体外分离、纯化人表皮干细胞促进皮肤的功能生理性修复

• 作者: 戴育成 李剑
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 干细胞 细胞培养 细胞分离 实验室技术和方法
• 年，卷（期）: 2003,（11）
• 所属期刊栏目: 基金项目
• 页码范围: 1620-1621
• 页数: 3页
• 分类号: R318
• 字数: 3911字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2003.11.003

摘要

目的表皮干细胞是皮肤发生、修复、重建的关键"种子细胞",因而研究建立人表皮干细胞体外分离、培养及鉴定的方法非常重要.方法通过酶消化法,分离小儿包皮的表皮与真皮层,表皮制成单细胞悬液,以高糖低钙的 DMEM培养基,补充 100 ml/L的干细胞培养专用胎牛血清( FBS), 0.05 mmol/L 氯化钙, 10 ng/ml表皮生长因子, 1× 10- 6 mol/L氢化可的松进行培养.在实验之前用胶原 IV包被直径 35 mm的培养皿,其中有些放置消毒盖玻片以制"细胞玻片 ",置 4 ℃冰箱中放置 30 min以上,吸干胶原 IV,再将培养皿置室温下自然干燥半小时以上,备用.调整细胞含量为 2× 106/ml ,接种于包被好胶原 IV的培养皿中快速黏附 10～ 15 min( 37 ℃),弃去未黏附细胞,保留快速黏附细胞继续培养.培养至 21 d对所培养细胞进行流式细胞仪α 6 、CD71表型鉴定,角蛋白 19( K19)、角蛋白 5( K5)免疫细胞化学染色鉴定以及形态学观察、克隆计数.结果在胶原 IV包被的培养皿中快速贴壁细胞经继续培养,可见细胞克隆数增多,细胞传代次数达 8～ 10次,培养时间达 2个月.K19, K5免疫化学染色阳性,α 6 briCD71dim 细胞占细胞总数的 40%左右.结论研究表明用胶原 IV快速黏附法可从包皮分离和富集表皮干细胞,用此体外培养体系,可较好地扩增表皮干细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李剑		6	43	3.0	6.0
2	戴育成	江西医学院第二附属医院血液科	23	139	9.0	11.0