绿荧光蛋白标记人骨髓源性神经干细胞的体外实验研究

• 作者: 姜晓丹 张旺明 徐如祥 杜谋选 蔡颖谦 邹雨汐
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 干细胞 神经系统/细胞学 骨髓 细胞培养 荧光抗体技术
• 年，卷（期）: 2003,（25）
• 所属期刊栏目: 基金项目
• 页码范围: 3439-3441
• 页数: 4页
• 分类号: R741
• 字数: 6675字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2003.25.006

摘要

目的:探讨重组腺相关病毒包装绿荧光蛋白(rAAV-GFP)标记人骨髓源性神经干细胞(BM.NSCs)的可行性,为进一步行标记细胞移植实验研究奠定基础. 方法:以成人自愿者的骨髓为研究对象,梯度密度离心法分离获取骨髓基质细胞并用" Cytokine@神经干细胞培养基"诱导分化为神经干细胞,分化的细胞以免疫细胞化学鉴定.对接种生长的 BM.NSCs(1×105～6/mL)以无血清培养基冲洗并重悬细胞,依最佳病毒感染指数(MOI)为 105的标准计算、加入包装了 GFP的 rAAV病毒颗粒,连续培养 12 h(37℃,50 mL/L CO2)以感染细胞;补加100 g/L胎牛血清后,于神经干细胞培养基中继续细胞培养24 h(37℃,50 mL/L CO2)以上,荧光显微镜(Olympus IX70, Japan)追踪观察 rAAV GFP标记的 BM.NSCs. 结果:BM.NSCs于标记后 1周内见不到GFP阳性表达 ; 在标记10 d后才出现有GFP阳性表达情况 (平均每个200倍镜下视野可见到 5～10个GFP阳性细胞),所标记的细胞在荧光显微镜下呈亮绿色;随着培养时间延长,BM.NSCs表达GFP也逐渐增强、阳性细胞数量逐渐增多,并可于 1个月时最明显(标有 GFP阳性的细胞可达 BM.NSCs总数的60%),追踪观察到到2.5个月时亦未见衰减. 结论:rAAV GFP在人骨髓源性神经干细胞中的表达较迟,但呈渐强趋势; rAAV GFP标记人骨髓源性神经干细胞具有可行性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐如祥	解放军第一军医大学珠江医院全军神经医学研究所	32	227	9.0	12.0
2	张旺明	解放军第一军医大学珠江医院全军神经医学研究所	3	39	3.0	3.0
3	姜晓丹	解放军第一军医大学珠江医院全军神经医学研究所	15	138	8.0	11.0
4	杜谋选	解放军第一军医大学珠江医院全军神经医学研究所	4	40	3.0	4.0
5	邹雨汐	解放军第一军医大学珠江医院全军神经医学研究所	6	77	5.0	6.0
6	蔡颖谦	解放军第一军医大学珠江医院全军神经医学研究所	6	61	4.0	6.0